Comparación entre dos métodos de obtención de DNA a ser usados como protocolos alternativos para la detección de parásitos humanos causadores de malaria por nested PCR

Resumen

Un diagnóstico de laboratorio correcto y preciso de malaria humana todavia se considera un desafio, pues el método de referencia, el de la gota espesa con colocación en Giemsa, presenta limitaciones que dificultan el control de la malaria. Debido a esos problemas, varias investigaciones han tenido como objetivo desarrollar métodos alternativos para el diagnóstico de la malaria. Gran parte de esos estudios aborda métodos de diagnóstico molecular, que han resultado en el desarrollo de algunas alternativas al método de tenido por Giemsa. Sin embargo, esos métodos, por su vez, presentan limitaciones, que incluyen su alto costo, la complejidad del protocolo y la variación de la calidad de las fuentes de DNA y de reactivos. En este aspecto, la técnica de nested PCR ha demostrado ser un buen método y puede ser mejorado usando una fuente de DNA de alta calidad. En este estudio se evaluaron dos métodos para la obtención de DNA de muestras de sangre seca recogidas en papel de filtro: 1) lavado y 2) saponina/Chelex-100. El segundo método presentó sensibilidad y especificidad más altas en relación al primero, pues detectó más infecciones, tanto simples como mixtas, bien como infecciones por Plasmodium malariae. Con base en estos resultados, presentamos el segundo método como el protocolo de elección para la obtención de DNA. La técnica de nested PCR usando saponina/Chelex-100 para extracción de DNA puede ser un método alternativo o complementario de diagnóstico de parásitos de la malaria humana, pero no se considera adecuado para uso de rutina.