Nested PCR utilizando la gota gruesa como fuente del ADN de Plasmodium: una alternativa para f rotis de sangre archivados

Resumen

El estudio tuvo como objetivo evaluar un protocolo de nested PCR, utilizando la prueba de la gota gruesa teñida por Giemsa (GG) como fuente de ADN de Plasmodium. Un total de 138 muestras de GG de pacientes de cinco municipios del Estado de Pará (Región Amazónica, Brasil) se incluyó en este estudio; estas muestras fueron clasificadas en tres grupos (grupo 1: 85 láminas de GE positivas y negativas para Plasmodium almacenados en una caja de plástico durante cinco años; grupo 2: 28 láminas de GG positivas y negativas para Plasmodium almacenados en una caja de madera durante diez años; y grupo 3: 25 láminas de GG positivas para Trypanosoma cruzi y negativas para Plasmodium, y sometidas a la extracción de ADN con Chelex-100. Posteriormente las muestras de ADN extraídas se cuantificaron y su integridad se verificó por electroforesis. El protocolo de nested PCR fue realizado para detectar las especies de Plasmodium. Los resultados de nested PCR fueron comparados con los de la microscopia y los parámetros estadísticos se calcularon por la prueba de selección. Las muestras de ADN de todos los grupos obtuvieron nivel de cantidad y de pureza adecuadas para la realización de PCR, pero la evaluación de integridad mostró 19 muestras degradadas del grupo 2. Por nested PCR, este grupo mostró baja sensibilidad (29,63%) y precisión (32,14%), mientras que las muestras del grupo 1 presentaron 100% de sensibilidad y 97,65% de precisión. Los resultados de esta investigación señalan que las muestras almacenadas por hasta cinco años pueden ser útiles como fuente de ADN de Plasmodium para que nested PCR identifique las especies de ese género, siendo una alternativa importante para apoyar estudios retrospectivos.